GB/T 33309-2016.Determination of vitamin B。( pyridoxine , pyridoxine hydrochloride,pyridoxine fatty acid esters and pyridoxal 5-phosphate ) in cosmetics-High performance liquid chromatography.
4.13盐 酸溶液(5.0 mol/L,0.1 mol/L):量取40 mL、0.8 mL盐酸(4.9)分别放人两个100 mL容量瓶中,用水定容,分别得5.0 mol/L.0.1 mol/L盐酸溶液。
4.14氢氧化钠溶液(5.0 mol/L,0.1 mol/L) :称取20 g.0.4 g氢氧化钠用水溶解,分别放入两个100 mL容量瓶中,用水定容,分别得5.0 mol/L、0.1 mol/L氢氧化钠溶液。
4.15离子对 试剂缓冲溶液[0.02 mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液(含0.001 mol/L七氟丁酸)];称取2.30 g磷酸二氢铵，加入约980 mL水溶解,用30%磷酸(4.11)或30%氨水(4.12)调节pH值至4.5,加入170 μ七氟丁酸(4.2),用水定容至1 L备用。
4.16磷酸氢二钠溶液(0.1 mol/L) :称取17.8 g磷酸氢二钠(4.7),用水溶解,定容至1 000 mL,用氢氧化钠溶液(4.14)调节pH值至9.8,备用。
4.17碱性磷酸酶溶液(1.0g/L):称取50mg碱性磷酸酶,用水定容至50mL.临用前配制。
4.18标准样品:吡哆素和吡哆醛,纯度不小于99.0%。维生索B,(吡哆素、盐酸吡哆素、吡哆索脂肪酸酯和吡哆醛5-磷酸酯)的CAS号、分子式、相对分子质量、化学结构式参见附录A. .
4.19维生素 B。(吡哆素、吡哆醛)标准贮备液(1 mg/mL):准确称取0.025 g(精确至0.000 1 g)吡哆素、吡哆醛标准品,分别置于25 mL容量瓶中,用水溶解定容,配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，于4 C避光保存,有效期3个月。
4.20维生素B,(吡哆素、吡哆醛)混合标准中间液1(100μg/mL)、混合标准中间液2(10μg/mL):分别准确吸取维生素B, 标准贮备液(4.19)5 mL、0.5 mL至50 mL容量瓶中,用水溶解、定容,混匀。
4.21维生素B%(吡哆素、吡哆醛)混合标准系列工作液:分别准确吸取维生素B混合标准中间液2(4.20)0.1 mL.1.0 mL,混合标准中间液1(4.20)1.0 mL.5.0 mL,10.0 mL、20.0 mL至100 mL容量瓶中,用水溶解定容。该标准系列浓度分别为0.01 μg/mL、0.1 μg/mL.1.0 pμg/mL.5.0 μg/mL、10.0 μg/ mL. 20.0μg/mL。临用前配制。
4.22微孔滤膜: 0.45 μm,有机相。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱(HPLC)仪:配有荧光检测器。
5.2 分析天平:感量为0.000 1 g和0.01 g.
5.3 涡旋混合器。
5.4水浴 振荡器。
5.5 pH 计。
5.6具 塞塑料离心管:50 mL.
6分析步骤